第四步:更换载体还不表达，选择GST、MBP、SUMO、GB1等助溶标签融合表达。另外，当目的蛋白太小或太大时可能都不易表达:小肽易被降解;太长例如大的膜蛋白等表达量往往也很难优化。当然，表达温度以及诱导时间也会对蛋白的...

诱导表达没有目的蛋白产生原因无非两种一是诱导条件不适合目的蛋白的表达，可通过改变培养基，温度，诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。二是目的蛋白的菌种有问题，可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养，或者质粒重新转化表达菌...

首先确定你的基因序列的正确性，必要的话可以优化密码子；2.可以换几个表达载体试一下；3.调整培养基成分、PH，培养温度，转速，诱导剂浓度等表达条件。

1可能是太弱你看不出来，建议用His抗体做个western看看是不是有条带而看不出。2是不是融解性太差，建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体...

光这两个我就折腾了3个来月的时间，很是挫败）。有个换载体表达成功了，有个换载体换表达菌株都没有表达出来，，，所以，这个就暂停了。等有空再换另一种载体，或者换酶切位点，搞其他的表达吧！

而将移码缺失补上后，目的条带变强了很多。可能的原因是移码时发生了小比例的ribosomalframeshift，表达出了类似大小的带myc标签的蛋白。而你的目的片段如果突变出个终止密码子什么的，也可能表达出微量蛋白的。

而当有诱导剂（这里指IPTG）存在时，诱导剂可与阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白构象发生变化，导致阻遏物从操纵基因O上解离下来，RNA聚合酶不再受阻碍，启动子P开始发生转录，启动反应开始发生转录。在这个操纵子（元）体系中，...

蛋白直接没有诱导出来。导结果差别不大的话，是蛋白直接没有诱导出来，换个载体重新构建质粒导入新的感受态细胞试着再诱导一下看看。广义的原核表达，是指发生在原核生物内的基因表达。狭义的原核表达，常出现于生物工程中。...

构建的载体有问题呗序列全对么是不是太长了

一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6，然后加入终浓度1mM的IPTG（这个一般不变，诱导不出来再考虑适当多加点，例如2-5mM），但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同，需要摸索的，你可以做个预实验，隔两个...