另外,看一下之前的实验记录,是否其他步骤出了问题。比如诱导的温度、IPTG浓度等。这些因素对蛋白的可溶性也影响比较大。
可能的原因是移码时发生了小比例的ribosomalframeshift,表达出了类似大小的带myc标签的蛋白。而你的目的片段如果突变出个终止密码子什么的,也可能表达出微量蛋白的。
诱导表达没有目的蛋白产生原因无非两种一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌...
首先确定你的基因序列的正确性,必要的话可以优化密码子;2.可以换几个表达载体试一下;3.调整培养基成分、PH,培养温度,转速,诱导剂浓度等表达条件。
可能是包涵体形成了,不是不表达,而是蛋白不溶解!
保证是连接到载体上,并且载体也是转入表达菌的,不行的话,通常做法是调节诱导剂浓度,诱导时间,不行就换载体,如BL21换ROSSETTA等,再不行就换载体。其实我也遇到,有个蛋白始终没有表达,没办法放弃了。
而酵母菌能够进行糖基化和跨膜运输,就能够外分泌可溶表达。别说是不同的菌株了,就算是同一种菌株在不同温度和诱导条件下也可能对同一蛋白出现不同的表达策略,例如GST标签的蛋白就经常在大肠杆菌里以低温进行可溶性表达。
确认诱导蛋白对大肠杆菌有没有毒性,如果有的话,那肯定的。。。
蛋白直接没有诱导出来。导结果差别不大的话,是蛋白直接没有诱导出来,换个载体重新构建质粒导入新的感受态细胞试着再诱导一下看看。广义的原核表达,是指发生在原核生物内的基因表达。狭义的原核表达,常出现于生物工程中。...
要获得诱导型蛋白,就要施加诱导信号,例如甲醇启动子诱导的蛋白质在发酵时添加甲醇后就能开始表达,通过对甲醇添加量、添加时间等的条件优化就能得到最大的表达量,而组成型蛋白不需要诱导,只要进行发酵就有蛋白表达,但达到...