先测序看看序列是不是三的倍数，保证是连接到载体上，并且载体也是转入表达菌的，不行的话，通常做法是调节诱导剂浓度，诱导时间，不行就换载体，如BL21换ROSSETTA等，再不行就换载体。其实我也遇到，有个蛋白始终没有表达...

1可能是太弱你看不出来，建议用His抗体做个western看看是不是有条带而看不出。2是不是融解性太差，建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体...

①不表达，从基因上开始分析，无论是用那种宿主表达蛋白，真核表达或是原核表达，都要考虑到基因优化的层面，如果基因本身不适在此系统中表达，那么下游在怎么优化也是不表达的②表达条件的优化，转染效率是否转染成功，细胞...

你再多挑些斑试试，真核质粒不表达，很多时候是因为转染效率太低。我们这有挑了将近100个才找到表达的

是不是启动子是高温启动子，例如热激蛋白的启动子，这样就只有高温诱导才表达了。如果是大肠杆菌的话在高温可能翻译过程不稳定，导致在遇到某些稀有密码子时翻译中止。

第四步：更换载体还不表达，选择GST、MBP、SUMO、GB1等助溶标签融合表达。另外，当目的蛋白太小或太大时可能都不易表达：小肽易被降解；太长例如大的膜蛋白等表达量往往也很难优化。当然，表达温度以及诱导时间也会对蛋白...

可能是包涵体形成了，不是不表达，而是蛋白不溶解!

原因有很多可能：质粒上的目的基因被宿主系统破坏；目的基因对应蛋白对细胞有毒害作用，被细胞反馈调节到抑制表达；目的基因表达与细胞本身特点能力不符；质粒载体选择与表达系统不合适；检测方法有问题，有表达，但是没有检测出来...

蛋白不表达就说明他的转录和翻译，这个过程出现了问题。表达量低说明他这个合成蛋白质的效率是很低的，可能在盘旋折叠最后一个部分出现了问题。如果帮到了你给个采纳点个赞，谢谢！

使用genedesigner（DNAtool2.0）非常经典不过你的蛋白不表达，很可能是形成了包涵体，这个是一个非常大的问题，更换可溶性表达标签是一个方法建议你去查一查文献