在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。正在生长的大肠杆菌在0°C下加入到低渗的冰冷的CaCl2溶液中，便会造成细胞膨胀成球（感受态细胞）；感受态细胞与外源质粒DNA形成一种黏着在细胞表面上的对DNA...

一般地,DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%,1ng的cccDNA即可使50ul的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言,分子量大的转化效率低,实验证明,大于30kb的重组质粒将很难进行转化。此外,重组DNA分子的构型与转化效率也密切...

农杆菌GV3101转化质粒的热激法步骤如下：1.将-80℃保存的GV3101农杆菌感受态细胞在冰上或室温融化。2.在无菌条件下，向刚刚化冻的感受态细胞悬液中加入1μg需要转化的质粒DNA，轻轻混匀，冰水浴中静置10分钟。3.将...

转化A.将-700C下保存的感受态细胞（200μl），室温下解冻后放置于冰上。B.将ND-PUCm-T质粒DNA溶液（不超过50ng）或PCR产物与pUCm-T质粒的连结产物，体积不超过10μl，轻轻摇匀，冰上放置30min。C.420C水浴中热...

1)取100ul新鲜制备的感受态细胞,加入质粒1ulDNA混匀,同时设置对照组(未加质粒,未加受体菌,已知具有转化活性的DNA)。冷冻的感受态细胞要在冰上解冻,待管中最后一点冰融化后,迅即加入DNA.解冻感受态细胞温度高于0℃,会降低转化效率...

CaCl2法制备感受态的原理感受态细胞的制备质粒的转化转化子的筛选材料及方法菌种：大肠杆菌BL21菌株质粒：pGEX-6P-1感受态制备方法：CaCl2法转化方法：热激法CaCl2制备感受态的原理。细菌处于0·C，CaCl2的低渗溶液...

AGL1感受态细胞实验原理：目前,感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备,即用低渗CaCl2溶液在低温（0℃）时处理快速生长的细菌,从而获得感受态细菌.此时细菌膨胀成球形,外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基...

大肠杆菌感受态细胞的制备和转化准备：一.材料E.coliDH5α菌株:Rˉ,Mˉ,Ampˉ；pBS质粒DNA:购买或实验室自制,eppendorf管.二.设备恒温摇床,电热恒温培养箱,台式高速离心机,无菌工作台,低温冰箱,恒温水浴锅,机,分...

感受态细胞的制备如下：1、从37℃培养过夜的新鲜平板中挑DH5α单菌落，接种到5mLLB培养基中，37℃下270r/min震荡培养过夜；2、取2mL过夜培养菌液注入到100mLLB培养基中，37℃下激烈震荡培养至A600=0.4～0.6（约2h）...

但如果先用一定浓度的钙离子处理大肠杆菌细胞，再用质粒DNA和染色体DNA对它做转化实验则情况恰好相反。此外，质粒DNA很容易进入去掉了细胞壁的细菌的原生质体，说明对它的吸收并不通过专门的接受位点；质粒DNA的转化过程没有整合...