发夹结构、反向配对、GC含量、退火温度、引物长度、端最好是C、G（提高结合度）、引物在序列中的错配位点。大致就这几个方面，重要性依次降低，由其是3，端绝对不能形成发夹结构。其实设计引物都只是好中选优的问题。以20...

无缝克隆反向设计引物方法如下：线性化目的载体：用酶切或是PCR方式；PCR获取目的片段。无缝克隆的原理首先要强调的是，无缝克隆有两个主要的流派：Gibsonassembly和GoldenGateassembly。退火温度需要比解链温度低5℃，如果引物碱...

PCR引物设计原则1、引物长度一般在15-30bp。引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不应大于38bp，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应；2、引物GC含量一般为40%-60%。引...

在头尾两端设计引物。1、cdna序列选取一组引物，要求引物混合中不同引物的Tm值相近。2、cdna序列和所选的引物，计算符合头尾位点要求的引物混合成分。3、计算出来的比例和用量，混合所需的引物，得到最终用于扩增cdna全长的...

有基因序列号,你就可以直接上genebank下载其序列,下载到全序列,你需要扩增的CDS区,也就是编码区,可以全外显子扩增,这样简单一点,也可以做cDNA克隆,然后再做,前者的话就可以直接根据其基因序列NG号设计引物,如果是做CDNA的...

引物直接前面取ATG开始或者前面20-25nt,Tm控制在40-50之间，后面取TAA，TGA，TAG开始或者后面20-25nt,Tm控制在40-50之间，两者Tm最好相近。

1你先看你想连接的载体上面有哪些克隆位点（酶切位点可以用），然后看你原来的质粒上基因两端有没有这些位点，如果有，ok，同时用两个酶切质粒和载体，然后目的片断相连；2质粒上没有想要的位点，就用引物将基因扩增...

1你先看你想连接的载体上面有哪些克隆位点(酶切位点可以用)，然后看你原来的质粒上基因两端有没有这些位点，如果有，ok，同时用两个酶切质粒和载体，然后目的片断相连;2质粒上没有想要的位点，就用引物将基因扩增出来...

把序列前后保留200bp，设计引物的时候，引物长度设置在25-27左右

建议你先上网学习一下引物设计最简单的一些知识我设计引物是用Omiga软件的，使用比较简单，只要新建一个核酸文件，把目的基因序列粘贴进去，扩增全长的话一般都是手工选取18~22bp长度，再加入内切酶碱基和保护碱基(上游引物从...